■ ใช้งานง่าย: ชุดอุปกรณ์นี้เป็นพรีมิกซ์ 2 เท่า และ PCR สามารถทำได้โดยเพียงแค่เพิ่มเทมเพลตและไพรเมอร์
■ ความเที่ยงตรงสูง: ความเที่ยงตรงสูงคือ 50 เท่าของ Taq polymerase
■ ความจำเพาะสูง: ประสิทธิภาพการสตาร์ทที่ยอดเยี่ยมเพื่อให้แน่ใจว่ามีความจำเพาะของผลิตภัณฑ์..
■ การขยายอย่างรวดเร็ว: ความเร็วในการขยายสามารถเข้าถึง 10-15 วินาที/kb
■ การขยายที่แข็งแกร่ง: สามารถขยายชิ้นส่วนดีเอ็นเอได้ถึง 20 kb
■ ใช้งานได้กว้าง: ชุดอุปกรณ์ประกอบด้วย PCR Enhancer และเหมาะสำหรับการขยาย GC สูงและเทมเพลตที่ซับซ้อน
ชนิด: DNA Polymerase ความเที่ยงตรงสูง
ความเร็วในการขยาย: 10-15 วินาที/kb
ขนาดชิ้นส่วน: <20kb
การใช้งาน: การขยาย PCR ที่มีความเที่ยงตรงสูง, การโคลนยีน, การขยายเทมเพลต GC สูง, การโคลนยีนของจีโนมที่ซับซ้อน, การขยายความเที่ยงตรงสูง cDNA, การตรวจจับ SNP, การกลายพันธุ์เฉพาะไซต์ ฯลฯ
ผลผลิตการสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อพืชต่างๆ:
หมายเหตุ: ผลลัพธ์ของ DNA ขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่าง วัสดุทั้งหมดข้างต้นมาจากใบอ่อน
ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดสามารถปรับแต่งสำหรับ ODM/OEM สำหรับรายละเอียดกรุณาคลิกบริการที่กำหนดเอง (ODM/OEM)
![]() |
Hot-start เพื่อรับรองความเฉพาะเจาะจงของผลิตภัณฑ์ รูปที่ 1 Ultra HiFi มีฟังก์ชัน hot-start ที่ยอดเยี่ยมเพื่อให้แน่ใจว่ามีความจำเพาะของผลิตภัณฑ์เครื่องขยายเสียง ใช้วิธีบีคอนระดับโมเลกุล (Ma et al., Anal Biochem, 2006) |
![]() |
ความเที่ยงตรงสูงเป็นเลิศ สูงกว่า Taq Polymerase ถึง 50 เท่า รูปที่ 2 ความเที่ยงตรงของ Ultra HiFi สูงกว่า Taq polymerase ทั่วไปถึง 50 เท่า ความถูกต้องของการเกิดพอลิเมอไรเซชันของ Taq polymerase (โดยไม่มีกิจกรรมการแก้ไข) ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง |
![]() |
การขยายอย่างรวดเร็วและชิ้นส่วนที่ยาวสามารถขยายได้อย่างรวดเร็ว รูปที่ 3. Ultra HiFi สามารถขยายได้ถึง 5 วินาที/kb สำหรับชิ้นส่วนที่เล็กกว่า 4 kb สำหรับชิ้นส่วนที่ยาว สามารถขยายเวลาขยายได้อย่างเหมาะสม สำหรับชิ้นส่วนที่มากกว่า 15 kb ความเร็วของขอบเขตอาจสูงถึง 30 วินาที/kb M: เครื่องหมาย TIANGEN D15000 |
![]() ![]() ![]() |
ความเป็นสากลที่แข็งแกร่งและความจำเพาะสูง GC สูงและส่วนย่อยยาวที่อ่านง่ายจากแหล่งต่างๆ รูปที่ 4 Ultra HiFi มีความจำเพาะสูงเพื่อให้แน่ใจว่าอัตราความสำเร็จในการขยายเสียงและปริมาณผลิตภัณฑ์สำหรับเทมเพลตประเภทต่างๆ A. ผลการขยายสัญญาณ Ultra HiFi B. ผลการขยายเอนไซม์ Hi-Fi ของซัพพลายเออร์ K C. ผลการขยายเอนไซม์ Hi-Fi ของซัพพลายเออร์ N M: เครื่องหมาย TIANGEN D15000 เลน 1-5. ผลการขยายของเทมเพลตที่มีความยาวต่างกัน: 1. 750 bp; 2. 1 กิโลไบต์; 3. 2 กิโลไบต์; 4. 4 kb; 5. 6 kb เลน 6 ผลการขยายของเทมเพลต GC สูง: 1915 bp (GC%: 70%); เลน 7-11. ผลการขยายของเทมเพลต 2 kb จากจีโนมต่างๆ: 7. หนู; 8. ข้าว; 9. ข้าวสาลี; 10. ข้าวโพด; 11. แบคทีเรีย; เลน 12-14. ผลการขยายส่วนยาว 8 kb: 12. ข้าว; 13. ข้าวโพด; |
เทมเพลต A-1
■ แม่แบบประกอบด้วยสิ่งเจือปนโปรตีนหรือสารยับยั้ง Taq เป็นต้น —— ทำให้แม่แบบ DNA บริสุทธิ์ ขจัดสิ่งเจือปนของโปรตีน หรือแยก DNA แม่แบบด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์
■ การเปลี่ยนสภาพของแม่แบบไม่สมบูรณ์ —— เพิ่มอุณหภูมิการเสื่อมสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น
■ การลดขนาดเทมเพลต —— เตรียมเทมเพลตอีกครั้ง
A-2 ไพรเมอร์
■ ไพรเมอร์คุณภาพต่ำ —— สังเคราะห์ไพรเมอร์อีกครั้ง
■ การเสื่อมสภาพของไพรเมอร์ —— แบ่งไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นสูงเป็นปริมาตรเล็กๆ เพื่อถนอมอาหาร หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายหลายครั้งหรือแช่เย็นที่อุณหภูมิ 4°C ในระยะยาว
■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม (เช่น ความยาวไพรเมอร์ไม่เพียงพอ มีไดเมอร์เกิดขึ้นระหว่างไพรเมอร์ เป็นต้น) -ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ (หลีกเลี่ยงการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์และโครงสร้างรอง)
A-3 มก.2+ความเข้มข้น
■ มก2+ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม2+ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม2+ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด2+ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์
A-4 อุณหภูมิการหลอม
■ อุณหภูมิการหลอมที่สูงส่งผลต่อการยึดเกาะของสีรองพื้นและแม่แบบ —— ลดอุณหภูมิการหลอมและปรับสภาพให้เหมาะสมด้วยการไล่ระดับ 2°C
A-5 ขยายเวลา
■ ขยายเวลาสั้น——เพิ่มเวลาขยาย.
ปรากฏการณ์: ตัวอย่างเชิงลบยังแสดงแถบลำดับเป้าหมายด้วย
A-1 การปนเปื้อนของ PCR
■ การปนเปื้อนข้ามของลำดับเป้าหมายหรือผลิตภัณฑ์ที่มีการขยายเสียง —— ระวังอย่าปิเปตตัวอย่างที่มีลำดับเป้าหมายในตัวอย่างเชิงลบหรือหกออกจากหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง น้ำยาหรืออุปกรณ์ควรผ่านการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำเพื่อกำจัดกรดนิวคลีอิกที่มีอยู่ และควรพิจารณาการมีอยู่ของการปนเปื้อนผ่านการทดลองควบคุมเชิงลบ
■ การปนเปื้อนรีเอเจนต์ —— แบ่งรีเอเจนต์และเก็บที่อุณหภูมิต่ำ
A-2 ไพรม์r
■ มก2+ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม2+ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม2+ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด2+ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์
■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม และลำดับเป้าหมายมีความคล้ายคลึงกันกับลำดับที่ไม่ใช่เป้าหมาย ——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่
ปรากฏการณ์: แถบขยายสัญญาณ PCR ไม่สอดคล้องกับขนาดที่คาดไว้ ไม่ว่าจะใหญ่หรือเล็ก หรือบางครั้งมีทั้งแถบขยายสัญญาณเฉพาะและแถบขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจงเกิดขึ้น
เอ-1 ไพรเมอร์
■ความจำเพาะของไพรเมอร์แย่
——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่
■ ความเข้มข้นของไพรเมอร์สูงเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการทำให้เสียสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น
A-2 มก.2+ ความเข้มข้น
■ Mg2+ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ Mg2+ อย่างเหมาะสม: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม2+ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด2+ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์
A-3 พอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้
■ ปริมาณเอนไซม์ที่มากเกินไป —— ลดปริมาณเอนไซม์อย่างเหมาะสมในช่วงเวลา 0.5 U
A-4 อุณหภูมิการหลอม
■ อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสมหรือใช้วิธีการหลอมแบบสองขั้นตอน
A-5 PCR รอบ
■ รอบ PCR มากเกินไป —— ลดจำนวนรอบ PCR
เอ-1 ไพรเมอร์——ความจำเพาะไม่ดี —— ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ เปลี่ยนตำแหน่งและความยาวของไพรเมอร์เพื่อเพิ่มความจำเพาะ หรือดำเนินการ PCR ที่ซ้อนกัน
A-2 แม่แบบ DNA
—— แม่แบบไม่บริสุทธิ์ —— ทำให้แม่แบบบริสุทธิ์หรือแยก DNA ด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์
A-3 มก.2+ ความเข้มข้น
——Mg2+ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลด Mg . อย่างเหมาะสม2+ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม2+ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด2+ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์
A-4 dNTP
——ความเข้มข้นของ dNTP สูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ dNTP อย่างเหมาะสม
A-5 อุณหภูมิการหลอม
—— อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสม
A-6 รอบ
—— รอบมากเกินไป —— ปรับหมายเลขรอบให้เหมาะสม
ขั้นตอนแรกคือการเลือกพอลิเมอเรสที่เหมาะสม Taq polymerase ปกติไม่สามารถพิสูจน์อักษรได้เนื่องจากขาดกิจกรรม exonuclease 3'-5' และไม่ตรงกันจะลดประสิทธิภาพการขยายของแฟรกเมนต์ลงอย่างมาก ดังนั้น Taq polymerase ปกติจึงไม่สามารถขยายชิ้นส่วนเป้าหมายที่มีขนาดใหญ่กว่า 5 kb ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ควรเลือก Taq polymerase ที่มีการดัดแปลงพิเศษหรือโพลิเมอร์ที่มีความเที่ยงตรงสูงอื่นๆ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายและตอบสนองความต้องการของการขยายชิ้นส่วนแบบยาว นอกจากนี้ การขยายชิ้นส่วนที่มีความยาวยังต้องการการปรับการออกแบบไพรเมอร์ เวลาการเปลี่ยนสภาพ เวลาในการขยาย ค่า pH ของบัฟเฟอร์ ฯลฯ โดยปกติแล้ว ไพรเมอร์ที่มี 18-24 bp จะทำให้ได้ผลผลิตดีขึ้น เพื่อป้องกันความเสียหายของแม่แบบ ควรลดเวลาในการเปลี่ยนสภาพที่ 94°C เป็น 30 วินาทีหรือน้อยกว่าต่อรอบ และเวลาในการเพิ่มอุณหภูมิเป็น 94°C ก่อนการขยายเสียงควรน้อยกว่า 1 นาที นอกจากนี้ การตั้งอุณหภูมิการขยายที่ประมาณ 68°C และการออกแบบเวลาการขยายตามอัตรา 1 kb/นาที สามารถรับประกันการขยายชิ้นส่วนที่ยาวได้อย่างมีประสิทธิภาพ
อัตราความผิดพลาดของการขยาย PCR สามารถลดลงได้โดยใช้ DNA polymerase ต่างๆ ที่มีความเที่ยงตรงสูง ในบรรดา Taq DNA polymerase ทั้งหมดที่พบจนถึงตอนนี้ เอนไซม์ Pfu มีอัตราความผิดพลาดต่ำสุดและความเที่ยงตรงสูงสุด (ดูตารางแนบ) นอกจากการเลือกเอนไซม์แล้ว นักวิจัยสามารถลดอัตราการกลายพันธุ์ของ PCR ได้อีกโดยการปรับสภาวะของปฏิกิริยาให้เหมาะสม รวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพองค์ประกอบบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของพอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้ และการปรับหมายเลขรอบ PCR ให้เหมาะสม
นับตั้งแต่ก่อตั้ง โรงงานของเราได้พัฒนาผลิตภัณฑ์ระดับโลกเป็นครั้งแรกโดยยึดมั่นในหลักการ
ที่มีคุณภาพก่อน ผลิตภัณฑ์ของเราได้รับชื่อเสียงที่ดีเยี่ยมในอุตสาหกรรมและมีคุณค่าความไว้วางใจจากลูกค้าทั้งเก่าและใหม่..