ชุด PCR เลือดโดยตรง

การขยายอย่างรวดเร็วของยีนเป้าหมายโดยตรงโดยใช้เลือดเป็นแม่แบบโดยไม่ต้องสกัด

ชุดนี้ใช้ DNA polymerase ที่ต่อต้านการยับยั้งที่ดัดแปลงพันธุกรรมเพื่อขยายยีนสำเนาเดียวในจีโนมมนุษย์อย่างมีประสิทธิภาพ ระบบบัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสมที่สุดในชุดนี้ช่วยให้โพลีเมอเรสต้านทานการยับยั้งสารยับยั้ง PCR ได้อย่างมาก จึงสามารถขยาย DNA ได้โดยตรงโดยใช้เลือดและเซลล์ที่เพาะเลี้ยงเป็นแม่แบบ ผลิตภัณฑ์นี้ใช้งานง่ายและไม่ต้องการขั้นตอนที่ซับซ้อน เช่น การทำให้ DNA บริสุทธิ์หรือการปรับสภาพตัวอย่าง
ชุดนี้จัดทำเป็น 2×MasterMix และปฏิกิริยาสามารถทำได้โดยเพียงแค่เพิ่มเทมเพลตเลือดและไพรเมอร์การตรวจจับที่เกี่ยวข้อง สามารถใช้กับเซลล์เพาะเลี้ยงของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เช่น มนุษย์ หนู สุกร วัวควาย และสายพันธุ์อื่นๆ รวมทั้งเลือดครบส่วนสดหรือแช่เยือกแข็ง 4 องศาเซลเซียส สารกันเลือดแข็ง (EDTA ซิเตรต เฮปาริน) ลิ่มเลือดเหลว และจุดเลือดแห้ง เก็บไว้ในการ์ดเชิงพาณิชย์ Whatman 903 และ FTA Elute

แมว. เลขที่	ขนาดบรรจุ
4992529	20 µl×100 rxn
4992530	20 ไมโครลิตร×500 rxn

ส่งอีเมล์ถึงเรา

รายละเอียดผลิตภัณฑ์

ตัวอย่างการทดลอง

คำถามที่พบบ่อย

แท็กสินค้า

คุณสมบัติ

■ ง่ายและรวดเร็ว: การขยาย PCR สามารถทำได้โดยตรงโดยใช้เลือดเป็นแม่แบบ โดยไม่ต้องใช้ขั้นตอนที่ยุ่งยากในการเตรียมตัวอย่างและการสกัดดีเอ็นเอ
■ ความบริสุทธิ์สูง: การข้ามขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างก่อนการบำบัดและการสกัดดีเอ็นเอสามารถช่วยหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามตัวอย่างได้
■ ปริมาณงานสูง: การระบุ PCR สำหรับตัวอย่างขนาดใหญ่สามารถทำได้โดยการรวมชุดอุปกรณ์เข้ากับเพลต PCR 96/384 หลุม
■ ความเป็นสากลที่แข็งแกร่ง: ชุดอุปกรณ์นี้สามารถขยายชิ้นส่วน GC หรือชิ้นส่วนที่มีโครงสร้างทุติยภูมิที่ซับซ้อนได้อย่างมีประสิทธิภาพ และความยาวของการขยายสามารถสูงถึง 5 kb
■ ทนทานต่อความเครียดสูง: ชุดอุปกรณ์นี้ใช้ได้กับสายพันธุ์ต่างๆ และตัวอย่างเลือดที่เก็บรักษาไว้ในรูปแบบต่างๆ

แอปพลิเคชั่น

ผลิตภัณฑ์ PCR ของชุดอุปกรณ์นี้มี “A” ที่ส่วนปลาย 3′ ซึ่งสามารถนำไปใช้โดยตรงสำหรับการโคลนเวกเตอร์ TA ชุดอุปกรณ์นี้สามารถใช้สำหรับการขยายชิ้นส่วนดีเอ็นเอของจีโนม การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมปริมาณมาก และการวิเคราะห์จีโนไทป์ (เช่น การตรวจหายีน)

ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดสามารถปรับแต่งสำหรับ ODM/OEM สำหรับรายละเอียดกรุณาคลิกบริการที่กำหนดเอง (ODM/OEM)

ก่อนหน้า: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

ต่อไป: ชุด PCR เนื้อเยื่อของเมาส์โดยตรง

	การใช้สารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA ของมนุษย์เป็นเทมเพลต ยีน 4 ตัวที่มีเนื้อหา GC ต่างกันได้รับการขยายโดย Blood Direct PCR Kit ระบบปฏิกิริยา PCR คือ 20 ไมโครลิตร และเลือด 1 ไมโครลิตรถูกใช้เป็นแม่แบบ M: TIANGEN Marker II; 1: ขนาดชิ้นส่วน 1090 bp เนื้อหา GC 68.1%; 2: ขนาดชิ้นส่วน 1915 bp, GC เนื้อหา 70.4%; 3: ขนาดชิ้นส่วน 448 bp, GC 74.8%; 4: ขนาดชิ้นส่วน 1527 bp เนื้อหา GC 61.5% ผลการทดลอง: Blood Direct PCR Kit สามารถขยายชิ้นส่วน DNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพด้วยเนื้อหา GC ที่ช่วง 61.5%-74.8% ซึ่งบ่งชี้ว่าสามารถขยายชิ้นส่วน GC สูงได้
	การใช้สารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA ของมนุษย์เป็นเทมเพลต ยีน 5 ตัวที่มีความยาวต่างกัน (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 และ Hn4.0) ได้รับการขยายโดย Blood Direct PCR Kit ระบบปฏิกิริยา PCR คือ 20 ไมโครลิตร และเลือด 1 ไมโครลิตรถูกใช้เป็นแม่แบบ M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 ตัวอย่างเลือดที่แตกต่างกัน; กทช: ควบคุมโดยไม่ใช้ไพรเมอร์ ผลการทดลอง: Blood Direct PCR Kit สามารถขยายชิ้นส่วนที่มีความยาวได้ถึง 4 kb ซึ่งบ่งชี้ว่าสามารถขยายชิ้นส่วนที่มีความยาวได้
	การใช้สารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA ของมนุษย์เป็นเทมเพลต ชุด Blood Direct PCR ใช้สำหรับตรวจหา PCR ของตัวอย่างเลือดต่างๆ ระบบปฏิกิริยา PCR คือ 20 ไมโครลิตร และเลือด 1 ไมโครลิตรถูกใช้เป็นแม่แบบ M: TIANGEN Marker II; 1-9: ปริมาณเลือดบรรจุ 0.1 ไมโครลิตร 0.2 ไมโครลิตร 0.3 ไมโครลิตร 0.4 ไมโครลิตร 1 ไมโครลิตร 2 ไมโครลิตร 3 ไมโครลิตร 4 ไมโครลิตร และ 5 ไมโครลิตร ตามลำดับ กทช: ควบคุมโดยไม่มีเทมเพลต ผลการทดลอง: Blood Direct PCR Kit มีความทนทานต่อเลือดและสามารถขยายตัวอย่างเลือดด้วยช่วงการบรรจุ 0.1-5 ไมโครลิตร
	ตัวอย่างเลือดจากคน หนู ไก่ และสายพันธุ์อื่นๆ ที่มีการบำบัดต่างกันถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบ Blood Direct PCR Kit ใช้เพื่อขยาย PRNP (มนุษย์ 750 bp), Actin (หนู 200 bp) และ β-Actin (ไก่ 1.0 kb) ระบบปฏิกิริยา PCR คือ 20 ไมโครลิตร และเลือด 1 ไมโครลิตรถูกใช้เป็นแม่แบบ M: TIANGEN มาร์กเกอร์ II ผลการทดลอง: สามารถใช้ Blood Direct PCR Kit กับตัวอย่างได้หลากหลาย และการตรวจจับ PCR โดยตรงสามารถทำได้กับตัวอย่างเลือดจากสายพันธุ์ต่างๆ ด้วยการรักษาที่แตกต่างกัน

ถาม: ไม่มีแถบขยายเสียง

เทมเพลต A-1

■ แม่แบบประกอบด้วยสิ่งเจือปนโปรตีนหรือสารยับยั้ง Taq เป็นต้น —— ทำให้แม่แบบ DNA บริสุทธิ์ ขจัดสิ่งเจือปนของโปรตีน หรือแยก DNA แม่แบบด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์

■ การเปลี่ยนสภาพของแม่แบบไม่สมบูรณ์ —— เพิ่มอุณหภูมิการเสื่อมสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น

■ การลดขนาดเทมเพลต —— เตรียมเทมเพลตอีกครั้ง

A-2 ไพรเมอร์

■ ไพรเมอร์คุณภาพต่ำ —— สังเคราะห์ไพรเมอร์อีกครั้ง

■ การเสื่อมสภาพของไพรเมอร์ —— แบ่งไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นสูงเป็นปริมาตรเล็กๆ เพื่อถนอมอาหาร หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายหลายครั้งหรือแช่เย็นที่อุณหภูมิ 4°C ในระยะยาว

■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม (เช่น ความยาวไพรเมอร์ไม่เพียงพอ มีไดเมอร์เกิดขึ้นระหว่างไพรเมอร์ เป็นต้น) -ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ (หลีกเลี่ยงการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์และโครงสร้างรอง)

A-3 มก.²⁺ความเข้มข้น

■ มก²⁺ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-4 อุณหภูมิการหลอม

■ อุณหภูมิการหลอมที่สูงส่งผลต่อการยึดเกาะของสีรองพื้นและแม่แบบ —— ลดอุณหภูมิการหลอมและปรับสภาพให้เหมาะสมด้วยการไล่ระดับ 2°C

A-5 ขยายเวลา

■ ขยายเวลาสั้น——เพิ่มเวลาขยาย.

ถาม: ผลบวกลวง

ปรากฏการณ์: ตัวอย่างเชิงลบยังแสดงแถบลำดับเป้าหมายด้วย

A-1 การปนเปื้อนของ PCR

■ การปนเปื้อนข้ามของลำดับเป้าหมายหรือผลิตภัณฑ์ที่มีการขยายเสียง —— ระวังอย่าปิเปตตัวอย่างที่มีลำดับเป้าหมายในตัวอย่างเชิงลบหรือหกออกจากหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง น้ำยาหรืออุปกรณ์ควรผ่านการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำเพื่อกำจัดกรดนิวคลีอิกที่มีอยู่ และควรพิจารณาการมีอยู่ของการปนเปื้อนผ่านการทดลองควบคุมเชิงลบ

■ การปนเปื้อนรีเอเจนต์ —— แบ่งรีเอเจนต์และเก็บที่อุณหภูมิต่ำ

A-2 ไพรม์r

■ มก²⁺ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม และลำดับเป้าหมายมีความคล้ายคลึงกันกับลำดับที่ไม่ใช่เป้าหมาย ——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่

ถาม: การขยายสัญญาณแบบไม่เฉพาะเจาะจง

ปรากฏการณ์: แถบขยายสัญญาณ PCR ไม่สอดคล้องกับขนาดที่คาดไว้ ไม่ว่าจะใหญ่หรือเล็ก หรือบางครั้งมีทั้งแถบขยายสัญญาณเฉพาะและแถบขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจงเกิดขึ้น

เอ-1 ไพรเมอร์

■ความจำเพาะของไพรเมอร์แย่

——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่

■ ความเข้มข้นของไพรเมอร์สูงเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการทำให้เสียสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น

A-2 มก.²⁺ ความเข้มข้น

■ Mg²⁺ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ Mg2+ อย่างเหมาะสม: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-3 พอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้

■ ปริมาณเอนไซม์ที่มากเกินไป —— ลดปริมาณเอนไซม์อย่างเหมาะสมในช่วงเวลา 0.5 U

A-4 อุณหภูมิการหลอม

■ อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสมหรือใช้วิธีการหลอมแบบสองขั้นตอน

A-5 PCR รอบ

■ รอบ PCR มากเกินไป —— ลดจำนวนรอบ PCR

ถาม: แถบเป็นหย่อมหรือเปื้อน

เอ-1 ไพรเมอร์——ความจำเพาะไม่ดี —— ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ เปลี่ยนตำแหน่งและความยาวของไพรเมอร์เพื่อเพิ่มความจำเพาะ หรือดำเนินการ PCR ที่ซ้อนกัน

A-2 แม่แบบ DNA

—— แม่แบบไม่บริสุทธิ์ —— ทำให้แม่แบบบริสุทธิ์หรือแยก DNA ด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์

A-3 มก.²⁺ ความเข้มข้น

——Mg²⁺ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลด Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-4 dNTP

——ความเข้มข้นของ dNTP สูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ dNTP อย่างเหมาะสม

A-5 อุณหภูมิการหลอม

—— อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสม

A-6 รอบ

—— รอบมากเกินไป —— ปรับหมายเลขรอบให้เหมาะสม

ถาม: ควรเพิ่มเทมเพลต DNA เท่าใดในระบบปฏิกิริยา PCR ขนาด 50 ไมโครลิตร

ถาม: จะขยายชิ้นส่วนที่ยาวได้อย่างไร

ขั้นตอนแรกคือการเลือกพอลิเมอเรสที่เหมาะสม Taq polymerase ปกติไม่สามารถพิสูจน์อักษรได้เนื่องจากขาดกิจกรรม exonuclease 3'-5' และไม่ตรงกันจะลดประสิทธิภาพการขยายของแฟรกเมนต์ลงอย่างมาก ดังนั้น Taq polymerase ปกติจึงไม่สามารถขยายชิ้นส่วนเป้าหมายที่มีขนาดใหญ่กว่า 5 kb ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ควรเลือก Taq polymerase ที่มีการดัดแปลงพิเศษหรือโพลิเมอร์ที่มีความเที่ยงตรงสูงอื่นๆ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายและตอบสนองความต้องการของการขยายชิ้นส่วนแบบยาว นอกจากนี้ การขยายชิ้นส่วนที่มีความยาวยังต้องการการปรับการออกแบบไพรเมอร์ เวลาการเปลี่ยนสภาพ เวลาในการขยาย ค่า pH ของบัฟเฟอร์ ฯลฯ โดยปกติแล้ว ไพรเมอร์ที่มี 18-24 bp จะทำให้ได้ผลผลิตดีขึ้น เพื่อป้องกันความเสียหายของแม่แบบ ควรลดเวลาในการเปลี่ยนสภาพที่ 94°C เป็น 30 วินาทีหรือน้อยกว่าต่อรอบ และเวลาในการเพิ่มอุณหภูมิเป็น 94°C ก่อนการขยายเสียงควรน้อยกว่า 1 นาที นอกจากนี้ การตั้งอุณหภูมิการขยายที่ประมาณ 68°C และการออกแบบเวลาการขยายตามอัตรา 1 kb/นาที สามารถรับประกันการขยายชิ้นส่วนที่ยาวได้อย่างมีประสิทธิภาพ

ถาม: จะปรับปรุงความเที่ยงตรงของการขยายสัญญาณของ PCR ได้อย่างไร

อัตราความผิดพลาดของการขยาย PCR สามารถลดลงได้โดยใช้ DNA polymerase ต่างๆ ที่มีความเที่ยงตรงสูง ในบรรดา Taq DNA polymerase ทั้งหมดที่พบจนถึงตอนนี้ เอนไซม์ Pfu มีอัตราความผิดพลาดต่ำสุดและความเที่ยงตรงสูงสุด (ดูตารางแนบ) นอกจากการเลือกเอนไซม์แล้ว นักวิจัยสามารถลดอัตราการกลายพันธุ์ของ PCR ได้อีกโดยการปรับสภาวะของปฏิกิริยาให้เหมาะสม รวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพองค์ประกอบบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของพอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้ และการปรับหมายเลขรอบ PCR ให้เหมาะสม

เขียนข้อความของคุณที่นี่และส่งถึงเรา

หมวดหมู่สินค้า

ทำไมถึงเลือกพวกเรา

นับตั้งแต่ก่อตั้ง โรงงานของเราได้พัฒนาผลิตภัณฑ์ระดับโลกเป็นครั้งแรกโดยยึดมั่นในหลักการ
ที่มีคุณภาพก่อน ผลิตภัณฑ์ของเราได้รับชื่อเสียงที่ดีเยี่ยมในอุตสาหกรรมและมีคุณค่าความไว้วางใจจากลูกค้าทั้งเก่าและใหม่..

สอบถาม