2×Taq Platinum PCR มิกซ์

HotStart บริสุทธิ์พิเศษ DNA polymerase ความเที่ยงตรงสูง

Taq Platinum DNA Polymerase เป็น HotStart Taq polymerase ที่ดัดแปลงทางเคมี โดยมีกิจกรรม exonuclease 3′-5′ และกิจกรรม exonuclease 5′-3′ กิจกรรมของเอนไซม์ของ Taq Platinum DNA Polymerase ถูกบล็อกที่อุณหภูมิห้อง กิจกรรมสามารถเปิดใช้งานได้หลังจากให้ความร้อนที่ 94°C เป็นเวลา 5-10 นาทีเท่านั้น จึงหลีกเลี่ยงการขยายแบบไม่จำเพาะที่เกิดจากการหลอมแบบไม่จำเพาะของไพรเมอร์หรือไพรเมอร์หรี่ที่อุณหภูมิต่ำก่อนรอบเริ่มต้นของปฏิกิริยา PCR และปรับปรุงความไวอย่างมาก และความจำเพาะของปฏิกิริยา PCR นอกจากนี้ Taq Platinum DNA Polymerase มีความเที่ยงตรงสูงมาก ซึ่งดีเป็นอันดับสองรองจาก Pfu polymerase ความเร็วในการขยายของ DNA polymerization นั้นเร็วกว่า Pfu polymerase และประสิทธิภาพการขยายก็สูงกว่า

แมว. เลขที่	ขนาดบรรจุ
4992789	5x1ml
4992790	5×1 มล.

ส่งอีเมล์ถึงเรา

รายละเอียดผลิตภัณฑ์

ตัวอย่างการทดลอง

คำถามที่พบบ่อย

แท็กสินค้า

คำจำกัดความของกิจกรรม

กิจกรรม 1 หน่วย (U) Taq Platinum DNA Polymerase ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการรวม 10 nmol deoxynucleotides ลงในสารที่ไม่ละลายในกรดที่อุณหภูมิ 74°C ภายใน 30 นาทีโดยใช้ DNA สเปิร์มของปลาแซลมอนที่กระตุ้นเป็นแม่แบบ/ไพรเมอร์

ควบคุมคุณภาพ

ความบริสุทธิ์โดยการตรวจจับ SDS-PAGE มากกว่า 99%; ไม่พบกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก ยีนสำเนาเดียวในจีโนมมนุษย์สามารถขยายได้อย่างมีประสิทธิภาพ ไม่มีการเปลี่ยนแปลงกิจกรรมที่สำคัญเมื่อเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์

พารามิเตอร์ทางเทคนิคหลัก

มีกิจกรรม exonuclease 5'-3' และกิจกรรม exonuclease 3'-5' และความถูกต้องอยู่ถัดจาก Pfu polymerase ความเร็วในการขยายของ Taq Platinum Polymerase นั้นเร็วกว่า Pfu polymerase และประสิทธิภาพการขยายเสียงก็สูงกว่า ผลิตภัณฑ์ PCR สามารถผูกติดกับปลายทู่หรือโคลนด้วยเวกเตอร์ TA ได้โดยตรง หากจำเป็นต้องปรับปรุงประสิทธิภาพการโคลน ขอแนะนำให้ทำให้บริสุทธิ์ก่อนและเพิ่มระยะยื่น 3'-dA ก่อนทำการโคลนลงในเวกเตอร์ TA

One-tube Taq Platinum MasterMix (การรับรองผลิตภัณฑ์ไฮเทคระดับประเทศ)

■ Taq Platinum MasterMix ได้ปรับปรุงความจำเพาะและความไวของปฏิกิริยา PCR และสามารถขยายเทมเพลตที่ซับซ้อนด้วยเนื้อหา GC สูง โครงสร้างรอง และอื่นๆ ที่คล้ายกัน สามารถขยายสำเนาเทมเพลตเป้าหมายได้เพียง 2 ชุด เพื่อให้ได้ผลการทดสอบที่แม่นยำยิ่งขึ้น

■ สูตรเฉพาะของ Taq Platinum MasterMix ทำให้ระบบปฏิกิริยาทั้งหมดมีความเสถียรมาก และกิจกรรมจะไม่ได้รับผลกระทบจากการแช่แข็ง-ละลายซ้ำหรือการจัดเก็บระยะยาวที่ 4°C

■ สารละลาย PCR แบบผสมที่เตรียมไว้ล่วงหน้าที่เสถียรและมีประสิทธิภาพสามารถทำให้การทำงานรวดเร็วและง่ายดาย ซึ่งช่วยลดความเข้มของแรงงานและข้อผิดพลาดในการสุ่มตัวอย่างได้อย่างมาก ตัวเพิ่มประสิทธิภาพ PCR ประสิทธิภาพสูงและตัวเพิ่มประสิทธิภาพจะรวมอยู่ในส่วนผสม ซึ่งช่วยลดข้อกำหนดในเงื่อนไข PCR

■ ผลิตภัณฑ์นี้มีทั้งระบบที่มีสีย้อมและปราศจากสีย้อม ผลิตภัณฑ์ MasterMix ที่ประกอบด้วยสีย้อมสามารถถูกอิเล็กโตรโฟเรสได้โดยตรงหลังจาก PCR โดยไม่ต้องเพิ่มบัฟเฟอร์การโหลด

แอปพลิเคชั่น

สามารถแทนที่ Pfu polymerase เพื่อขยายผลิตภัณฑ์ที่มีความเที่ยงตรงสูงจากเทมเพลตที่ซับซ้อน เช่น จีโนม และเหมาะสำหรับการใช้งานต่างๆ เช่น การโคลนยีนการแสดงออก การกลายพันธุ์เฉพาะจุด และการวิเคราะห์ single nucleotide polymorphism (SNP) เป็นต้น

ข้อควรระวังในการออกแบบไพรเมอร์ PCR:

ความยาวไพรเมอร์มักจะ 20-25 เมอร์ อย่างไรก็ตาม เมื่อดำเนินการ PCR แบบแยกส่วนแบบยาว ควรเพิ่มความยาวไพรเมอร์เป็น 30-35 เมอร์

■ ไม่มีการจับคู่เสริมระหว่างไพรเมอร์ทั้งสอง โดยเฉพาะ 3 เบสสุดท้ายที่ปลาย 3′

■ เนื้อหา GC ควรเป็น 50-60% และหลีกเลี่ยง GC หรือ AT ที่อุดมไปด้วยในท้องถิ่น ในการทำให้ไพรเมอร์และเทมเพลทมีความเสถียร ให้หลีกเลี่ยงโครงสร้าง AT Rich ที่ปลาย 3′

■ หลีกเลี่ยงไพรเมอร์เพื่อสร้างโครงสร้างรอง

■ เลือกไพรเมอร์สองตัวที่มีอุณหภูมิ Tm ใกล้กัน

การคำนวณค่า Tm ของไพรเมอร์สำหรับ PCR:

■ เมื่อไพรเมอร์น้อยกว่า 20 mer: Tm=2°C×(A+T)+4°C×(G+C)

■ เมื่อไพรเมอร์มากกว่า 20 เมอร์: Tm=81.5+0.41×(GC%)-600/L โดยที่ L คือความยาวของไพรเมอร์

■ ตั้งอุณหภูมิการหลอมที่ (Tm-5)°C

PCR ไพรเมอร์อินพุต

ความเข้มข้นสุดท้ายที่เหมาะสมของไพรเมอร์สามารถเลือกได้ระหว่าง 0.1 μM ถึง 1.0 μM ความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่ต่ำเกินไปจะทำให้ได้ผลผลิตของผลิตภัณฑ์ที่มีการขยายเสียงต่ำ ในขณะที่ความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่สูงเกินไปมีแนวโน้มที่จะมีการขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจงมากกว่า โดยปกติ เมื่อปริมาณของเทมเพลต DNA มีขนาดใหญ่หรือเทมเพลต DNA ที่ซับซ้อน (เช่น DNA ของจีโนมมนุษย์) ถูกใช้เป็นเทมเพลต ความเข้มข้นของไพรเมอร์ควรลดลง เมื่อปริมาณของแม่แบบ DNA มีขนาดเล็กหรือใช้แม่แบบ DNA (เช่น plasmid DNA เป็นต้น) เป็นแม่แบบ ความเข้มข้นของไพรเมอร์ควรสูงขึ้น

ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดสามารถปรับแต่งสำหรับ ODM/OEM สำหรับรายละเอียดกรุณาคลิกบริการที่กำหนดเอง (ODM/OEM)

ก่อนหน้า: 2×HotStart Taq PCR มิกซ์

ต่อไป: 2×Taq Plus PCR มิกซ์

ใช้จีโนม DNA เป็นเทมเพลตเพื่อขยายแฟรกเมนต์ 1 kb หลังจากปฏิกิริยา PCR ให้ใช้ 5 ไมโครลิตรสำหรับการตรวจจับอิเล็กโตรโฟรีซิส

ถาม: ไม่มีแถบขยายเสียง

เทมเพลต A-1

■ แม่แบบประกอบด้วยสิ่งเจือปนโปรตีนหรือสารยับยั้ง Taq เป็นต้น —— ทำให้แม่แบบ DNA บริสุทธิ์ ขจัดสิ่งเจือปนของโปรตีน หรือแยก DNA แม่แบบด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์

■ การเปลี่ยนสภาพของแม่แบบไม่สมบูรณ์ —— เพิ่มอุณหภูมิการเสื่อมสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น

■ การลดขนาดเทมเพลต —— เตรียมเทมเพลตอีกครั้ง

A-2 ไพรเมอร์

■ ไพรเมอร์คุณภาพต่ำ —— สังเคราะห์ไพรเมอร์อีกครั้ง

■ การเสื่อมสภาพของไพรเมอร์ —— แบ่งไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นสูงเป็นปริมาตรเล็กๆ เพื่อถนอมอาหาร หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายหลายครั้งหรือแช่เย็นที่อุณหภูมิ 4°C ในระยะยาว

■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม (เช่น ความยาวไพรเมอร์ไม่เพียงพอ มีไดเมอร์เกิดขึ้นระหว่างไพรเมอร์ เป็นต้น) -ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ (หลีกเลี่ยงการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์และโครงสร้างรอง)

A-3 มก.²⁺ความเข้มข้น

■ มก²⁺ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-4 อุณหภูมิการหลอม

■ อุณหภูมิการหลอมที่สูงส่งผลต่อการยึดเกาะของสีรองพื้นและแม่แบบ —— ลดอุณหภูมิการหลอมและปรับสภาพให้เหมาะสมด้วยการไล่ระดับ 2°C

A-5 ขยายเวลา

■ ขยายเวลาสั้น——เพิ่มเวลาขยาย.

ถาม: ผลบวกลวง

ปรากฏการณ์: ตัวอย่างเชิงลบยังแสดงแถบลำดับเป้าหมายด้วย

A-1 การปนเปื้อนของ PCR

■ การปนเปื้อนข้ามของลำดับเป้าหมายหรือผลิตภัณฑ์ที่มีการขยายเสียง —— ระวังอย่าปิเปตตัวอย่างที่มีลำดับเป้าหมายในตัวอย่างเชิงลบหรือหกออกจากหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยง น้ำยาหรืออุปกรณ์ควรผ่านการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำเพื่อกำจัดกรดนิวคลีอิกที่มีอยู่ และควรพิจารณาการมีอยู่ของการปนเปื้อนผ่านการทดลองควบคุมเชิงลบ

■ การปนเปื้อนรีเอเจนต์ —— แบ่งรีเอเจนต์และเก็บที่อุณหภูมิต่ำ

A-2 ไพรม์r

■ มก²⁺ ความเข้มข้นต่ำเกินไป —— เพิ่ม Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

■ การออกแบบไพรเมอร์ที่ไม่เหมาะสม และลำดับเป้าหมายมีความคล้ายคลึงกันกับลำดับที่ไม่ใช่เป้าหมาย ——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่

ถาม: การขยายสัญญาณแบบไม่เฉพาะเจาะจง

ปรากฏการณ์: แถบขยายสัญญาณ PCR ไม่สอดคล้องกับขนาดที่คาดไว้ ไม่ว่าจะใหญ่หรือเล็ก หรือบางครั้งมีทั้งแถบขยายสัญญาณเฉพาะและแถบขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจงเกิดขึ้น

เอ-1 ไพรเมอร์

■ความจำเพาะของไพรเมอร์แย่

——ออกแบบไพรเมอร์ใหม่

■ ความเข้มข้นของไพรเมอร์สูงเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการทำให้เสียสภาพอย่างเหมาะสมและยืดเวลาการเสื่อมสภาพให้นานขึ้น

A-2 มก.²⁺ ความเข้มข้น

■ Mg²⁺ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ Mg2+ อย่างเหมาะสม: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-3 พอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้

■ ปริมาณเอนไซม์ที่มากเกินไป —— ลดปริมาณเอนไซม์อย่างเหมาะสมในช่วงเวลา 0.5 U

A-4 อุณหภูมิการหลอม

■ อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสมหรือใช้วิธีการหลอมแบบสองขั้นตอน

A-5 PCR รอบ

■ รอบ PCR มากเกินไป —— ลดจำนวนรอบ PCR

ถาม: แถบเป็นหย่อมหรือเปื้อน

เอ-1 ไพรเมอร์——ความจำเพาะไม่ดี —— ออกแบบไพรเมอร์ใหม่ เปลี่ยนตำแหน่งและความยาวของไพรเมอร์เพื่อเพิ่มความจำเพาะ หรือดำเนินการ PCR ที่ซ้อนกัน

A-2 แม่แบบ DNA

—— แม่แบบไม่บริสุทธิ์ —— ทำให้แม่แบบบริสุทธิ์หรือแยก DNA ด้วยชุดการทำให้บริสุทธิ์

A-3 มก.²⁺ ความเข้มข้น

——Mg²⁺ ความเข้มข้นสูงเกินไป —— ลด Mg . อย่างเหมาะสม²⁺ ความเข้มข้น: ปรับ Mg . ให้เหมาะสม²⁺ ความเข้มข้นโดยชุดของปฏิกิริยาตั้งแต่ 1 mM ถึง 3 mM โดยมีช่วงเวลา 0.5 mM เพื่อกำหนด Mg ที่เหมาะสมที่สุด²⁺ ความเข้มข้นสำหรับแต่ละแม่แบบและไพรเมอร์

A-4 dNTP

——ความเข้มข้นของ dNTP สูงเกินไป —— ลดความเข้มข้นของ dNTP อย่างเหมาะสม

A-5 อุณหภูมิการหลอม

—— อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป —— เพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสม

A-6 รอบ

—— รอบมากเกินไป —— ปรับหมายเลขรอบให้เหมาะสม

ถาม: ควรเพิ่มเทมเพลต DNA เท่าใดในระบบปฏิกิริยา PCR ขนาด 50 ไมโครลิตร

ถาม: จะขยายชิ้นส่วนที่ยาวได้อย่างไร

ขั้นตอนแรกคือการเลือกพอลิเมอเรสที่เหมาะสม Taq polymerase ปกติไม่สามารถพิสูจน์อักษรได้เนื่องจากขาดกิจกรรม exonuclease 3'-5' และไม่ตรงกันจะลดประสิทธิภาพการขยายของแฟรกเมนต์ลงอย่างมาก ดังนั้น Taq polymerase ปกติจึงไม่สามารถขยายชิ้นส่วนเป้าหมายที่มีขนาดใหญ่กว่า 5 kb ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ควรเลือก Taq polymerase ที่มีการดัดแปลงพิเศษหรือโพลิเมอร์ที่มีความเที่ยงตรงสูงอื่นๆ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายและตอบสนองความต้องการของการขยายชิ้นส่วนแบบยาว นอกจากนี้ การขยายชิ้นส่วนที่มีความยาวยังต้องการการปรับการออกแบบไพรเมอร์ เวลาการเปลี่ยนสภาพ เวลาในการขยาย ค่า pH ของบัฟเฟอร์ ฯลฯ โดยปกติแล้ว ไพรเมอร์ที่มี 18-24 bp จะทำให้ได้ผลผลิตดีขึ้น เพื่อป้องกันความเสียหายของแม่แบบ ควรลดเวลาในการเปลี่ยนสภาพที่ 94°C เป็น 30 วินาทีหรือน้อยกว่าต่อรอบ และเวลาในการเพิ่มอุณหภูมิเป็น 94°C ก่อนการขยายเสียงควรน้อยกว่า 1 นาที นอกจากนี้ การตั้งอุณหภูมิการขยายที่ประมาณ 68°C และการออกแบบเวลาการขยายตามอัตรา 1 kb/นาที สามารถรับประกันการขยายชิ้นส่วนที่ยาวได้อย่างมีประสิทธิภาพ

ถาม: จะปรับปรุงความเที่ยงตรงของการขยายสัญญาณของ PCR ได้อย่างไร

อัตราความผิดพลาดของการขยาย PCR สามารถลดลงได้โดยใช้ DNA polymerase ต่างๆ ที่มีความเที่ยงตรงสูง ในบรรดา Taq DNA polymerase ทั้งหมดที่พบจนถึงตอนนี้ เอนไซม์ Pfu มีอัตราความผิดพลาดต่ำสุดและความเที่ยงตรงสูงสุด (ดูตารางแนบ) นอกจากการเลือกเอนไซม์แล้ว นักวิจัยสามารถลดอัตราการกลายพันธุ์ของ PCR ได้อีกโดยการปรับสภาวะของปฏิกิริยาให้เหมาะสม รวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพองค์ประกอบบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของพอลิเมอเรสที่ทนความร้อนได้ และการปรับหมายเลขรอบ PCR ให้เหมาะสม

เขียนข้อความของคุณที่นี่และส่งถึงเรา

หมวดหมู่สินค้า

ทำไมถึงเลือกพวกเรา

นับตั้งแต่ก่อตั้ง โรงงานของเราได้พัฒนาผลิตภัณฑ์ระดับโลกเป็นครั้งแรกโดยยึดมั่นในหลักการ
ที่มีคุณภาพก่อน ผลิตภัณฑ์ของเราได้รับชื่อเสียงที่ดีเยี่ยมในอุตสาหกรรมและมีคุณค่าความไว้วางใจจากลูกค้าทั้งเก่าและใหม่..

สอบถาม