TGuide S96 เลือด/เซลล์/เนื้อเยื่อ RNA Kit

A-1 การสลายเซลล์หรือการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันไม่เพียงพอ

---- ลดการใช้ตัวอย่าง เพิ่มปริมาณบัฟเฟอร์ lysis เพิ่มการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและเวลาในการสลาย

A-2 ปริมาณตัวอย่างมากเกินไป

---- ลดปริมาณตัวอย่างที่ใช้หรือเพิ่มปริมาณบัฟเฟอร์ lysis

A-1 การสลายเซลล์ไม่เพียงพอหรือการทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน

---- ลดการใช้ตัวอย่าง เพิ่มปริมาณบัฟเฟอร์ lysis เพิ่มการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและเวลาในการสลาย

A-2 ปริมาณตัวอย่างมากเกินไป

----โปรดอ้างอิงถึงความสามารถในการประมวลผลสูงสุด

A-3 RNA ไม่ได้ถูกชะออกจากคอลัมน์อย่างสมบูรณ์

---- หลังจากเติมน้ำที่ปราศจาก RNase แล้ว ให้ปล่อยทิ้งไว้สักครู่ก่อนทำการปั่นแยก

A-4 เอทานอลในสารชะ

---- หลังจากล้างแล้ว ให้หมุนเหวี่ยงอีกครั้งและเอาบัฟเฟอร์การซักออกให้มากที่สุด

สื่อเพาะเลี้ยงเซลล์ A-5 ไม่ได้ถูกกำจัดออกอย่างสมบูรณ์

---- เมื่อรวบรวมเซลล์ โปรดตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาอาหารเลี้ยงเชื้อออกให้มากที่สุด

A-6 เซลล์ที่เก็บไว้ใน RNAstore ไม่ได้รับการหมุนเหวี่ยงอย่างมีประสิทธิภาพ

----ความหนาแน่นของ RNAstore มากกว่าอาหารเลี้ยงเซลล์โดยเฉลี่ย ดังนั้นควรเพิ่มแรงเหวี่ยงหนีศูนย์กลาง แนะนำให้ปั่นแยกที่ 3000x กรัม

A-7 ปริมาณ RNA ต่ำและความอุดมสมบูรณ์ในตัวอย่าง

---- ใช้ตัวอย่างที่เป็นบวกเพื่อตรวจสอบว่าผลผลิตต่ำเกิดจากตัวอย่างหรือไม่

A-1 วัสดุไม่สด

---- เนื้อเยื่อสดควรเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวทันทีหรือใส่ลงในรีเอเจนต์ RNAstore ทันทีเพื่อให้แน่ใจว่าได้ผลการสกัด

A-2 ปริมาณตัวอย่างมากเกินไป

---- ลดจำนวนตัวอย่าง

สารปนเปื้อน A-3 RNasen

----แม้ว่าบัฟเฟอร์ที่ให้มาในชุดคิทจะไม่มี RNase แต่ก็สามารถปนเปื้อน RNase ได้ง่ายในระหว่างกระบวนการสกัด และควรจัดการด้วยความระมัดระวัง

A-4 มลพิษทางไฟฟ้า

---- เปลี่ยนบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิสและตรวจสอบให้แน่ใจว่าวัสดุสิ้นเปลืองและบัฟเฟอร์การโหลดปราศจากการปนเปื้อน RNase

A-5 โหลดมากเกินไปสำหรับอิเล็กโตรโฟรีซิส

---- ลดปริมาณการโหลดตัวอย่าง การโหลดของแต่ละหลุมไม่ควรเกิน 2 ไมโครกรัม

A-1 ปริมาณตัวอย่างมากเกินไป

---- ลดจำนวนตัวอย่าง

A-2 ตัวอย่างบางตัวอย่างมีปริมาณ DNA สูงและสามารถบำบัดด้วย DNase ได้

---- ดำเนินการบำบัด DNase ที่ปราศจาก RNase กับสารละลาย RNA ที่ได้รับ และ RNA สามารถใช้โดยตรงสำหรับการทดลองในภายหลังหลังการรักษา หรือสามารถทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมได้ด้วยชุดอุปกรณ์ทำให้บริสุทธิ์ RNA

สำหรับเครื่องแก้ว อบที่อุณหภูมิ 150 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 4 ชั่วโมง สำหรับภาชนะพลาสติก แช่ใน NaOH 0.5 โมลาร์เป็นเวลา 10 นาที จากนั้นล้างให้สะอาดด้วยน้ำที่ปราศจาก RNase แล้วฆ่าเชื้อเพื่อกำจัด RNase ออกให้หมด น้ำยาหรือสารละลายที่ใช้ในการทดลอง โดยเฉพาะน้ำ ต้องปราศจาก RNase ใช้น้ำที่ปราศจาก RNase สำหรับการเตรียมรีเอเจนต์ทั้งหมด (เติมน้ำลงในขวดแก้วที่สะอาด เพิ่ม DEPC ไปที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1% (V/V) เขย่าค้างคืนและนึ่งฆ่าเชื้อ)